大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                                                                                    96T
0.5µg/L - 12µg/L
 
使用目的：
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）含量。
實驗原理
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）水平。 用純化的大鼠Ⅱ型
膠原（Col Ⅱ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅱ型膠原（Col
Ⅱ），再與HRP 標記的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過
*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波
長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）濃度。  
試劑盒組成  
1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品（24µg/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
12µg/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
6µg/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
3µg/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
1.5µg/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
0.75µg/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
 
 
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、
待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個月